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    生化试剂盒

    还原糖含量试剂盒-可见分光光度法

    测定原理:

    加热促进碱性溶液中3,5-二硝基水杨酸溶液与还原糖生成棕红色氨基化合物,在540nm有特征吸收峰;在一定的浓度范围内,还原糖含量与540nm吸光度成线性关系,根据标准曲线,即可求出样品中还原糖的量。

    中文名称 还原糖含量试剂盒
    规格 48样
    货号

    E-316-SH

    价格 ¥500
    样本类型 血清,血浆,组织匀浆,细胞裂解液、细胞培养上清液等
    检测范围 详见说明书
    检测方法 可见分光光度法
    货期 3-5天
    说明书 咨询我司业务员获取
    文献 咨询我司业务员获取

        :正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定

    测定意义:

    还原糖广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中。植物体内的还原糖主要包括葡萄糖、果糖和麦芽糖等,是最常见的单糖和双糖,其中葡萄糖和果糖不仅是呼吸作用的主要底物,也是进一步合成蔗糖、淀粉和纤维素的底物。


    测定原理:

    加热促进碱性溶液中3,5-二硝基水杨酸溶液与还原糖生成棕红色氨基化合物,在540nm有特征吸收峰;在一定的浓度范围内,还原糖含量与540nm吸光度成线性关系,根据标准曲线,即可求出样品中还原糖的量。


    自备的仪器和用品:

    可见分光光度计、水浴、可调式移液器、1mL玻璃比色皿、研钵、蒸馏水。


    试剂的组成和配制:

    试剂一:100mL×1瓶,4℃保存;
    试剂二:15mL×1 ,4℃保存;


    样品中还原糖的提取:

    1、细菌或细胞的处理:收集细菌或细胞到离心管内,离心后弃上清按照细菌或细胞数量(104个):试剂一体积(mL)为500~1000:1的比例(建议1000万细菌或细胞加入2mL试剂一),超声波破碎细菌或细胞(冰浴,功率20%或200W,超声3S,间隔10S,重复30次),转移到有盖离心管中(防止加热时水分散失),80℃水浴中40min并且振荡8~10次,8000g,25℃离心10min,取上清供测定用。

    2、组织的处理:按照组织质量(g:试剂一体积(mL)1:5~10的比例(建议称取约0.2g组织,加入2mL试剂一),冰浴匀浆,转移到有盖离心管中(防止加热时水分散失),80℃水浴中40min并且振荡8~10次,8000g,25℃离心10min,取上清供测定用。

    3、血清(浆)的处理:按照血清(浆)体积(mL:试剂一体积(mL)1:5~10的比例(建议0.2mL血清(浆)加入2mL试剂一),冰浴匀浆,转移到有盖离心管中(防止加热时水分散失),80℃水浴中40min并且振荡8~10次,8000g,25℃离心10min,取上清供测定用。


    测定步骤:

    1、 分光光度计预热30min以上,调节波长至540nm,蒸馏水调零。

    2、 调节水浴锅至95℃。

    3、 EP管中加入下列试剂:

    试剂(μL

    对照管

    测定管

    样本

    700

    700

    试剂二

     

     500

    蒸馏水

    500

     

     

    将各管摇匀,在95℃水浴中加热5min(盖紧,防止水分散失),取出后立即冷却至室温,混匀。在540nm波长下读取对照管和测定管吸光值。计算ΔA=A测定-A对照每个测定管需设一个对照管。

    注意:如果ΔA大于2,需要将样本用试剂一稀释,计算公式中乘以相应稀释倍数(若显色后出现分层现象,可改用蒸馏水稀释)。


    还原糖含量计算:

    1、标准条件下测定回归方程为y = 8.3796x- 0.3034x为标准品浓度(mg/mL),y为吸光值。

    2、按样本鲜重计算:

    还原糖(μg/g鲜重)=[1000×(ΔA0.3034)÷ 8.3796×V1]÷(W×V1÷V2)=238.67×(ΔA0.3034)÷W

    3、按样本蛋白浓度计算:

    还原糖(μg/mg prot)=[1000×(ΔA0.3034)÷ 8.3796×V1]÷(V1×Cpr)=119.34×(ΔA0.3034)÷Cpr

    4、按细菌或细胞密度计算:

    还原糖(μg /104 cell)=[1000×(ΔA0.3034)÷ 8.3796×V1]÷1000×V1÷V2=0.239×(ΔA0.3034)

    5、按血清(浆)体积计算:

    还原糖(μg/mL)=[1000×(ΔA0.3034)÷ 8.3796×V1]÷V3×V1÷V2=1193.4×(ΔA0.3034) 

    1000:1mg/mL=1000µg/mLV1:加入样本体积,0.7mLV2:加入提取液体积,2 mLV3:加入血清(浆体积),0.2mLCpr:样本蛋白质浓度,mg/mLW:样质量,g1000:细菌或细胞总数,1000万。

    注意:最低检测限为1mg/g鲜重或10μg/mg prot




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